一、疾病概述与临床意义
真菌性龟头炎是泌尿外科及皮肤科常见的感染性疾病，主要由念珠菌属（尤其是白色念珠菌）感染引起，少数情况下可由曲霉菌、毛霉菌等非念珠菌属真菌导致。该病好发于包皮过长、糖尿病、长期使用广谱抗生素或免疫抑制剂人群，典型症状包括龟头红斑、瘙痒、白色豆腐渣样分泌物及局部灼热感。实验室检查是确诊真菌性龟头炎的核心依据，其结果不仅能明确病原体类型，还可为临床用药选择提供精准指导，避免盲目使用抗真菌药物导致的耐药性风险。
二、实验室检查前的临床评估与样本采集规范
（一）临床评估要点
在启动实验室检查前，需通过病史采集和体格检查初步判断感染可能性：
- 病史采集：重点关注患者是否存在包皮过长、不洁性生活史、糖尿病史，以及近期抗生素或激素使用情况；
- 症状与体征：典型表现为龟头黏膜红斑、丘疹或糜烂，伴白色奶酪样分泌物，部分患者可合并尿道口红肿或排尿刺痛；
- 鉴别诊断：需与细菌性龟头炎、滴虫性龟头炎、过敏性皮炎及生殖器疱疹等疾病区分，避免因症状相似导致误诊。
（二）样本采集方法与注意事项
- 分泌物采集：
- 使用无菌生理盐水浸湿的棉签，轻柔擦拭龟头表面及冠状沟处的分泌物，避免用力刮擦导致黏膜损伤；
- 若分泌物较少，可通过轻柔挤压包皮内侧促进样本脱落；
- 样本需立即放入无菌试管或真菌培养基中，避免干燥影响检出率。
- 皮损组织采集：
- 对于伴有糜烂或溃疡的患者，可使用无菌手术刀刮取皮损边缘的组织碎屑，放入10%氢氧化钾（KOH）溶液中保存；
- 采集过程中需严格无菌操作，防止杂菌污染。
- 注意事项：
- 采集前24小时内避免局部清洗或用药，以免影响样本浓度；
- 糖尿病患者需控制血糖后再采集样本，高血糖环境可能导致真菌过度繁殖干扰结果；
- 样本采集后需在2小时内送至实验室，若无法及时送检，应冷藏（4℃）保存，但冷藏时间不超过8小时。
三、基础实验室检查方法
（一）直接镜检法
直接镜检是真菌性龟头炎的快速筛查手段，操作简便、成本低，适合基层医疗机构开展：
- KOH湿片法：
- 原理：KOH溶液可溶解角质蛋白和细胞碎片，使真菌菌丝及孢子清晰可见；
- 操作步骤：取少量分泌物或组织样本置于载玻片，滴加10% KOH溶液1-2滴，盖上盖玻片后轻微加热（避免沸腾），静置3-5分钟后镜检；
- 镜下表现：可见分隔的真菌菌丝、芽生孢子或假菌丝，白色念珠菌典型形态为圆形或椭圆形孢子，常呈链状排列。
- 革兰染色法：
- 原理：真菌细胞壁含几丁质，革兰染色呈阳性（紫色），可与革兰阴性细菌（红色）区分；
- 优势：可同时观察细菌感染情况，适用于混合感染的初步判断。
（二）真菌培养与鉴定
培养法是确诊真菌性龟头炎的“金标准”，可明确真菌种类并进行药物敏感性试验：
- 培养基选择：
- 沙氏葡萄糖琼脂（SDA）：最常用基础培养基，适用于大多数真菌生长，25-30℃培养24-48小时可见白色念珠菌菌落呈奶油色、圆形隆起，表面光滑；
- 科玛嘉显色培养基：可通过菌落颜色快速鉴别念珠菌属，如白色念珠菌呈翠绿色，热带念珠菌呈蓝灰色；
- CHROMagar念珠菌显色培养基：特异性更高，适合临床快速鉴定。
- 鉴定流程：
- 形态学鉴定：观察菌落形态、颜色及镜下孢子和菌丝特征；
- 生化试验：通过糖发酵试验（如葡萄糖、麦芽糖发酵）、尿素酶试验等区分不同念珠菌种类；
- 分子生物学鉴定：对非念珠菌属真菌或疑难菌株，可采用PCR测序分析ITS（内转录间隔区）基因序列，准确率达99%以上。
四、进阶实验室检查技术
（一）真菌抗原检测
- β-D-葡聚糖检测（G试验）：
- 原理：真菌细胞壁成分β-D-葡聚糖可激活鲎试剂凝固酶原，通过比色法测定其浓度，正常值＜20 pg/ml；
- 优势：适用于深部真菌感染或免疫低下患者的早期诊断，但对浅表感染（如龟头炎）敏感性较低，需结合其他检查结果判断。
- 念珠菌甘露糖蛋白抗原检测：
- 通过ELISA法检测样本中念珠菌甘露糖蛋白，特异性达90%以上，可作为培养法的补充手段。
（二）核酸检测技术
- 聚合酶链反应（PCR）：
- 针对真菌保守基因（如18S rRNA、28S rRNA）设计引物，对样本中微量真菌DNA进行扩增，敏感性较培养法提高10-100倍；
- 实时荧光定量PCR（qPCR）可同时实现定性与定量分析，适用于疗效监测。
- 宏基因组测序（mNGS）：
- 无需培养即可直接对样本中所有微生物DNA进行测序，尤其适用于罕见真菌或混合感染的诊断，但成本较高，目前主要用于疑难病例。
五、实验室检查结果的解读与临床应用
（一）结果判读标准
- 直接镜检：
- 阳性结果：找到真菌菌丝或孢子；
- 阴性结果：需结合培养法进一步确认，避免假阴性（如样本采集不当或真菌数量过少）。
- 培养结果：
- 念珠菌属培养阳性需结合临床症状判断，健康人群龟头表面可能存在念珠菌定植，仅当菌落计数＞10³ CFU/ml且镜检见菌丝时可确诊感染；
- 非念珠菌属真菌（如曲霉菌）培养阳性时，需排除污染可能，建议重复采集样本。
（二）耐药性检测与用药指导
- 药敏试验方法：采用微量肉汤稀释法测定最低抑菌浓度（MIC），常用抗真菌药物包括氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑及两性霉素B；
- 耐药性判断标准：参照CLSI（美国临床和实验室标准协会）指南，白色念珠菌对氟康唑的耐药临界值为MIC≥8 μg/ml；
- 用药选择原则：
- 敏感菌株优先选择局部唑类药物（如克霉唑乳膏）；
- 耐药菌株或严重感染需口服伏立康唑或联合两性霉素B；
- 合并糖尿病或免疫低下患者需延长疗程，并监测肝肾功能。
六、常见问题与质量控制
（一）假阴性与假阳性原因分析
- 假阴性：
- 样本采集量不足或保存不当；
- 近期使用抗真菌药物抑制真菌生长；
- 直接镜检时未仔细观察多个视野。
- 假阳性：
- 实验室环境中真菌孢子污染（如曲霉菌）；
- 样本采集时接触操作者皮肤或毛发。
（二）质量控制措施
- 样本管理：建立样本采集-运输-检测全流程记录，确保可追溯性；
- 实验室操作：定期对培养基进行无菌性和促生长能力验证，规范染色步骤；
- 人员培训：加强检验人员对真菌形态学的识别能力，定期开展室间质评。
七、总结与展望
真菌性龟头炎的实验室检查需结合直接镜检、培养法及分子生物学技术，形成“筛查-确诊-药敏”的完整诊断链。未来随着宏基因组测序和快速抗原检测技术的普及，诊断效率将进一步提升，同时需关注真菌耐药性监测网络的建设，为个体化治疗提供更精准的实验室依据。临床医师应重视实验室检查结果与临床症状的结合，避免过度依赖单一检测方法导致的误诊误治，最终改善患者预后并降低复发率。
（全文约3200字）
